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使用克伦特罗检测试剂盒试验前的准备工作
发布时间:2019-12-17 点击量:209
       克伦特罗检测试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物克伦特罗将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗克伦特罗抗体,加入酶标记物后,用 TMB 底物显色,样本吸光值与其所含残留物克伦特罗的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出相应残留物克伦特罗的含量。
  克伦特罗检测试剂盒的样本前处理步骤:
  一、样本处理前须知
  (a)实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。
  (b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。
  u 样本前处理需配制:
  配液 1  0.1M HCl 溶液取 0.86ml 浓 HCl 加水定溶至 100ml。
  配液 2  0.1M NaOH 溶液称取 0.4g NaOH 加水定溶至 100ml。
  配液 3  乙腈-0.1M HCl 溶液V 乙腈:VHCl =84:16。
  二、样本处理:
  (a)尿样本的处理方法
  取 20?l 清亮尿样直接测定(如果尿样浑浊一定要过滤或 4000r/min 离心 10min,直至得到清亮尿样),暂不使用的样本应冷冻保存。 3、 在 ELISA 分析中的再现性,很大程度上取决于样本稀释倍数:  1 倍 洗板的*性,正确的洗板操作是 ELISA 测定
  (b)组织样本的处理方法一 程序中的要点。
  1、称 2±0.05g 均质后的组织至 50ml 离心管中,加 4、 所有恒温孵育过程,避免光线照射,用盖板膜入 6ml 去离子水,充分振荡 2min,室温 盖住微孔板。
  4000r/min 以上离心 10min(注:若组织样本中油 u  操作步骤:
  脂含量较高,可在振荡后放入 85℃水浴 10min 1、从 2~8℃冷藏环境中取出所需试剂,室温(20~后再离心); 25℃)平衡 30min 以上,注意每种液体试剂使
  2、取 20?l 上层液进行分析。 用前均须摇匀。
  样本稀释倍数:  4 倍 2、取出框架及需要数量的微孔,将不用的微孔放
  (c)组织样本的处理方法二 入自封袋,保存于 2~8℃。
  1、称取 2 ± 0.05g 均质后的组织于 50ml 离心管 3、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每中,加入 6ml 乙腈-0.1MHCl,振荡 2min,室温 个样本和标准品做 2 孔平行,并记录标准孔和
  4000r/min 以上离心 10min; 样本孔所在的位置。
  2、取上清 3ml,加入 2ml 0.1M NaOH,加入 6ml 4、加标准品/样本 20?l/孔到各自的微孔中,然后加乙酸乙酯,振荡 1min,室温 4000r/min 以上离 酶标记物 50?l/孔,再加入 80?l/孔的抗体工作心 10min。取全部上清于 50~60℃氮气流或空 液,用盖板膜盖板,轻轻振荡混匀,25℃环境气流吹干; 反应 30min。
  3、加入 1ml 去离子水溶解干燥后的残留物,混合 5、将孔内液体甩干,用去离子水 250?l/孔洗板 4~30s; 5 次,每次间隔 15~30 秒,用吸水纸拍干(拍
  4、取 20 ?l 用于分析。 干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
  样本稀释倍数: 1 倍 6、显色:加入底物 A 液 50?l/孔,再加入底物 B
  (d)饲料处理方法 液 50?l/孔,轻轻振荡混匀,25℃环境中避光显
  1、称1.0±0.05g 研碎的饲料样品于50ml 离心管中, 色 15min。
  加入 10ml 甲醇,再加入 5g 无水硫酸钠,充分 7、测定:加入终止液 50?l/孔,轻轻振荡混匀,设振荡 2min;15℃ 4000r/min 以上离心 10min; 定酶标仪于 450nm 处(建议用双波长 450/630n
  2、吸出离心后的上清液 1ml,于 50~60℃氮气流 m 检测,5min 内读数),测定每孔 OD 值。或空气流吹干,用 1 ml 去离子水溶解干燥后的 七、结果判定残留物,再加入 1ml 正己烷混合 30s ;15℃ 结果判定有两种方法,粗略判定可用第 1 种方4000r/min 以上离心 5min;去除上层有机相;
  法,定量判定用第 2 种方法。注意样本吸光度值与
  3、取下层 20 ?l 用于分析。
  其所含克伦特罗量成负相关。
  样本稀释倍数:10 1、粗略判定。
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