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RIPA裂解液(中)说明书
发布时间:2020-11-09 点击量:99

RIPA裂解液(中)说明书

 

RIPA Lysis Buffer

 

目录号:K2334

 

 保存条件:4℃保存。

 

 组分说明

 Cat. No.         K2334

Volume        100 ml

 

本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途产品简介

 

  RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液,主要用于从动物组织和哺乳

动物细胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可

以分为强、中、弱三类,具体特点和差异请参考附表2,可根据实验需求选择相应产品。

经RIPA裂解液(中)提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。

  RIPA裂解液(中)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1% NP-40,

0.5% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,

EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。

 

注意事项

 

1.为防止蛋白降解,所有的操作尽量在冰上进行。

2.使用RIPA裂解液得到的蛋白样品,可采用BCA法进行蛋白定量,以测定蛋白浓度。

   产品可单独向本公司订购,如:K0014  BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的

   去垢剂,不能用Bradford法进行蛋白定量。

3.建议在使用RIPA裂解液前,向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,以防止蛋

   白降解,或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购,如:K2200                                      蛋白酶抑制剂混合物,K2383 磷酸酶抑制剂混合物。

4.若需获得更高浓度的蛋白,应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。

5.对于培养瓶中的贴壁细胞,推荐先使用常规方法消化细胞,再参考悬浮细胞蛋白提

   取步骤操作。

6.对于离心获得的细胞,若不确定细胞体积,可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用

   量。如5×106个Hela细胞约需加入500 μl RIPA裂解液,以此类推。

 

操作步骤

 

  I  细胞样品

 · 贴壁细胞蛋白抽提

1.小心倾去贴壁细胞的培养液。

2.可选步骤:若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质,请先使用预冷的

   PBS漂洗细胞。

 

 

3.加入适量RIPA裂解液(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂),试剂使用量请参考

   附表1,在冰上用枪头吹打贴壁细胞。

 

                     表 1   贴壁细胞     RIPA 裂解液使用量推荐表

细胞培养板类型或培养面积                         RIPA  裂解液使用量

                     100 mm*                         500-1,000 µl

                      60 mm                          250-500 µl

                    6 孔培养板                          200-400 µl /孔

                   24 孔培养板                          100-200 µl /孔

                   96 孔培养板                          50-100 µl /孔

 

 * 对于100 mm培养板培养的107个细胞 (50 mg)可裂解获得约3 mg总蛋白(细胞类型不同略有差异)。

 

4.将裂解液转移至新的离心管中,冰上孵育20分钟,使细胞充分裂解。

5.14,000×g离心10分钟。转移上清液至新管中,进行下一步分析。

 

 · 悬浮细胞蛋白提取

1.悬浮细胞2,500×g,离心5分钟,弃去上清。

2.可选步骤:若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质,请使用PBS漂洗

   细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5分钟,弃去上清。

3.加入适量RIPA裂解液(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂),每5×106细胞加入约

   200-500 µl RIPA裂解液,吹打均匀。

4.冰上放置20分钟,使细胞充分裂解。

5.14,000×g离心10分钟。转移上清液至新管中,进行下一步分析。

  II  组织样品

1.取适当的RIPA裂解液,在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。

2.称量实验组织的重量,按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细

   小碎片,用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物,可适当减少组织蛋白

   抽提试剂使用量。

3.冰上孵育20分钟,使细胞充分裂解。

4.14,000×g 离心10分钟。转移上清液至新管中,进行下一步分析。

 

   注:RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为基因组。

 

 表2 蛋白裂解液性能、参数比较

                                                              

目录号    K2333                K2334           K2335             K2337

产品名称   RIPA 裂解液(强) RIPA 裂解液(中)  RIPA 裂解液(弱)  SDS  裂解液

             1%Triton X-100,    1% NP-40,        1% NP-40,         1%SDS

               1% sodium       0.5% sodium      0.25% sodium

有效裂解成分

             deoxycholate,    deoxycholate,     deoxycholate

               0.1% SDS         0.1% SDS

裂解强度          强                中               温和               强

膜蛋白提取       很好               较好               一般             很好

胞浆蛋白提取      很好               很好               很好            很好

核蛋白提取        很好               较好               较好            很好

主要用途          WB,IP            WB,IP       WB,IP,CO-IP       WB,CHIP

 

 

    相关产品信息

 

            目录号                 产品名称

            K2333              RIPA裂解液(强)

            K2334              RIPA裂解液(中)

            K2335              RIPA裂解液(弱)

            K2336              RIPA裂解液(强中弱套装)

            K2337              SDS裂解液

            K0002/K0889       哺乳动物蛋白抽提试剂/哺乳动物蛋白抽提试剂盒

            K0004/K0891       组织蛋白抽提试剂/组织蛋白抽提试剂盒

            K0199B             Nc-细胞核/浆蛋白抽提试剂盒

            K2200              蛋白酶抑制剂混合物

            K2383              蛋白磷酸酶抑制剂混合物

            K0014              BCA蛋白定量试剂盒

            K0022              SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

            K0023              ProteinShow-G250蛋白快速染色试剂

 

 

实验代做服务:

ELISA试剂盒免费代检测

CCK8检测

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫组化IHC染色

荧光定量PCR

动物模型服务

流式细胞检测

免疫荧光染色

激光共聚焦

DNA甲基化实验

石蜡/冰冻切片

透射电镜服务

扫描电镜实验

蛋白双向(2-D)

动物实验

免疫共沉淀

原位杂交(FIsh)

蛋白质纯化

分子克隆和质粒载体构建服务

组蛋白甲基化磷酸化乙酰化

 

蛋白双向2D-WB

 

药理毒理动物实验

 

番红O固绿染色

明胶酶谱MMP

酶活性检测

动物造模/模型实验服务

 

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