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土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性测定试剂盒说明书
发布时间:2020-06-29 点击量:53

土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性测定试剂盒说明书

微量法

测定意义:                           

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围,分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

测定原理:

碱性环境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。

自备仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。用前加100mL蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体×1瓶,4℃保存。

试剂四:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加576μL无水乙醇(自备),24μL蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用)

标准品:液体×1瓶,0.5μmol/mL苯酚标准液,4℃保存。

催化反应:

称取风干混匀土壤约0.1g,加入0.05mL甲苯(自备),轻摇15min;加0.4 mL试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。10000rpm室温离心10min,取上清液置于冰上待测。

显色反应:

1. 分光光度计预热30min以上,调节波长到660nm,蒸馏水调零。

2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL蒸馏水,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A空白管。

3. 标准管:微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL标准液,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A标准管。

4. 测定管:微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL上清液,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A测定管。

 

 

 

S-ALP活性计算:

活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放1μmol酚。

S-AKP/ALP(U/g土样)=[C标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)]×V总÷W÷T

                        = 0.725×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W

C标准液:0.5μmol/L;V总:催化体系总体积,1.45mL;W:土壤样品质量,g;T:催化反应时间,24 h=1 d。

 

 

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