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SDS-PAGE凝胶制备试剂盒说明书
发布时间:2020-05-20 点击量:94

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒说明书

 

SDS-PAGE Gel Kit

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

 

目录号:K0022

 

 

组分说明及保存条件

 

Catalog no.

 

 

 

 

K0022

K0022A

 

Size

40-60块胶

200-300块胶

保存条件

30%Acr-Bis(29:1)

100 ml

500 ml

2-8ºC

分离胶缓冲液

100 ml

500 ml

2-8ºC

浓缩胶缓冲液

50 ml

250 ml

2-8ºC

APS(过硫酸铵)

0.5 g

2.5 g

2-8ºC

TEMED

1 ml

5 ml

2-8ºC,避光

 

 

本产品所提供的APS(过硫酸铵)为固体粉末,使用前加入双蒸水溶解即配制10%APS溶液(0.5 g APS加5ml双蒸水、2.5  g APS加25ml双蒸水),将溶液分装后置于-20℃保存,通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。

 

 

            本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途  

 

 

产品简介

 

  本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂,只需自备蒸馏水,即可制备高质量

各种浓度的变性PAGE凝胶,方便、快捷。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中

已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

 

注意事项

 

1.  10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定,应尽量减少室温存放时间,每

   次取用后立即放回冰箱,以防失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用

   -20度保存的10%APS。

2.  PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关;在其它条件不变

   的情况下,可通过改变APS及TEMED的用量,控制PAGE凝胶的聚合速度,凝胶聚

   合过快不利于操作;附表中的 APS及TEMED量可供参考,应根据实际操作情况做

   适当的调整。

3.  在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。

4.  在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作,加水时速度不能太快。

5.  丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

6.  本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。

 

操作步骤

 

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,胶浓度请参考附表1。

 I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表3)

1.参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。

 

注:加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择。

2.将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。

3.加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

4.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于 mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端

   1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层,

   使凝胶表面保持平整。

 

5.静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。

 

 II灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表2)

1.去除覆盖在分离胶上的水层。

2.将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和双蒸水在一个小烧杯或试管中混合。

3.加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

4.将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

5.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

6.静置10~20分钟,等待浓缩胶聚合。

7.待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。

8.进行常规电泳操作。

 

附表

 

  附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与建议分离范围         

SDS-PAGE分离胶浓度

建议分离范围

6%胶

50-150 kD

8%胶

30-90 kD

10%胶

20-80 kD

12%胶

12-60 kD

15%胶

10-40 kD

 

 

    附表2.配制5%SDS-PAGE浓缩胶

凝胶体积

 

 

所需各组分体积(单位:ml)

10%APS

TEMED

 

双蒸水

30%Acr-Bis(29:1)

浓缩胶缓冲液(4×)

 

 

2 ml

1.14

0.34

0.5

0.02

0.002

4 ml

2.28

0.68

1

0.04

0.004

6 ml

3.42

1.02

1.5

0.06

0.006

8 ml

4.56

1.36

2.0

0.08

0.008

                 

实验代做服务:

ELISA试剂盒免费代检测

CCK8检测

基因组DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫组化

荧光定量PCR

动物模型服务

流式细胞检测

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化实验

细胞划痕

钙离子浓度检测

扫描电镜实验

microRNA测序

动物实验

探针合成

ATP/ADP检测

石蜡/冰冻切片

定点突变

线粒体膜电位(MMP)检测

细胞生长曲线的测定

药理毒理动物实验

 

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真核表达载体构建

染色质免疫沉淀CHIP

非标定量(Label-free)实验

      

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