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IM9 人外周血B淋巴细胞
发布时间:2020-05-14 点击量:54

IM9 人外周血B淋巴细胞

 

Product Format: a 15 ml centrifuge tube

Culture Properties悬浮

Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%双抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

 

Components  

Item

Specifications

a 15 ml centrifuge tube

2X106

Manual

1 copy

 

Operation steps for cell culture

  • 轻轻吹匀细胞,收集悬液1000rpm(150g左右)离心3min,弃上清;
  • 用新的完全培养基重悬细胞,均匀分为几份,接种到新的培养瓶中,并补加足量的完全培养基;

(悬浮细胞比较依赖细胞密度,细胞传代前及传代后密度不宜过低,过低可能会导致细胞生长缓慢或者死亡。细胞传代前培养基不能完全变黄,不然细胞状态变差会导致传代失败。传代过程吹打细胞应尽量轻柔,不应吹出过多气泡。)

  • 将细胞放回37度培养箱继续培养。

传代比例: 不同细胞生长速度不一,具体传代比例视细胞生长速度而定,大部分细胞适用1:3-1:4传代,生长较慢的细胞可以1:2传代。

Cell cryopreservation

  • 冻存液:92%完全培养基+8%DMSO(可以根据实验室条件自行选择)
  • 降温步骤:4度10min,-20度2h,-80过夜后液氮保存。

Tips:

  • 细胞经过运输后,部分细胞由于温度变化及剧烈碰zhuang死亡破碎形成碎片,是正常现象。贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900-1000rpm(约150g)离心3min,弃上清。加5ml PBS重悬细胞,再900-1000rpm(约150g)离心3min,用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片,如果平时碎片比较少,传代时可以省略PBS重悬的步骤;如果碎片很多,建议PBS多洗次。
  • 细胞生长不均时,可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。
  • 细胞生长缓慢时,可以选择提高血清浓度培养(高不超过20%),也可以根据细胞生长状态,选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。

不同细胞贴壁性差异比较大,所以消化时间差别较大,20s-10min均有可能,具体以细胞消化到相互分离但未脱落,并可以轻轻吹下为准,严禁消化到细胞完全漂浮。

三聚氰胺检测卡

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